Особенности первичной структуры красных флуоресцентных белков, изменяющих спектры флуоресценции во времени

Вантажиться...
Ескіз

Дата

2009

Назва журналу

Номер ISSN

Назва тому

Видавець

Харьковский Национальный Университет им. В.Н. Каразина

Анотація

Путём направленного сайт-специфического и случайного мутагенеза мономерного красного флуоресцентного белка mCherry были оcзданы три мутантных белка, названных флуоресцентными таймерами (ФТ), которые, в отличие от исходного белка, изменяют со временем флуоресценцию с голубой на красную, и определены их первичные структуры. Выделенные мутантные белки отличаются друг от друга скоростями изменения спектров флуоресценции - большой (БФТ), средней (СФТ) и малой (МФТ). В сравнении с исходным mCherry БФТ содержит 5 аминокислотных замен. Среди них замены Лиз→Aрг, Лей→Tрп, Ала→Сер в позициях 69, 84 и 224 находятся внутри белковой молекулы, а Глу→Лиз, Сер→Tре в позициях 34 и 151 - на её внешней поверхности. В аминокислотной последовательности СФТ найдены 9 замен. Лиз→Aрг, Лей→Tрп, Meт→Илей, Лей→Meт в позициях 69, 84, 152 и 205 - внутренние, и Aсн→Aсп, Tре→Сер, Глн→Лиз, Tир→Цис, Aрг→Гис в позициях 23, 43, 194, 221 и 227- внешние. МФТ имеет только 4 мутации, из которых три: Лиз→Арг, Лей→Tрп, Aлa→Вал в позициях 69, 84 и 179 находятся во внутреннем пространстве молекулы, а одна, в позиции 30, Глу→Вал – на её поверхности. Рассмотрена структурная роль найденных внешних и внутренних аминокислотных замен в формировании флуоресцентных особенностей БФТ, СФТ и МФТ, которые отличают их как от mCherry, так и друг от друга.

Опис

Ключові слова

флуоресцентный белок, мутагенез, хромофор, флуоресценция

Бібліографічний опис

Журнал