Спектральные характеристики красных флуоресцентных белков, изменяющих спектр флуоресценции во времени
Вантажиться...
Файли
Дата
2009
Назва журналу
Номер ISSN
Назва тому
Видавець
Харьковский Национальный Университет им. В.Н. Каразина
Анотація
Изучены спектральные характеристики трёх мономерных флуоресцентных белков - флуоресцентных таймеров (ФТ), созданных из исходного белка mCherry. Основной особенностью ФТ является способность изменять свою флуоресценцию с голубой на красную во времени. Полученные варианты характеризуются большим (Б), средним (С) и малым (М), временем созревания хромофора от голубого к красному. Время перехода от голубой флуоресценции к красной обратнопропорционально температуре. При температуре 370 C, максимумы голубой флуоресценции наблюдаются через 0,25, 1,2 и 9,8 часа для очищенных БФТ, СФТ и МФТ, соответственно. Полумаксимумы красной флуоресценции у этих белков наблюдаются через 3,9; 7,1 и 28 часов. У всех трёх вариантов ФТ пики возбуждения и флуоресценции для голубых форм равны 403 нм и 583 нм, а для красных форм – 466 нм и 606 нм соответственно. Флуоресценция всех изученных форм ФТ имеет высокую pH- стабильность в области рН от 4,5 до 7,5 со значением pKa, соответственно, около 3,0 для голубых и 4,1-4,7 для красных форм. Молярные коэффициенты экстинкции и квантовые выходы голубых форм ФТ находятся в пределах 33400-49700 M-1cм-1 и 0,30-0,41, соответственно Коэффициенты экстинкции красных форм ФТ выше, чем для голубых, и варьируют от 75300 M-1cм-1 у БФТ до 84200 M-1cм-1 у МФТ. Квантовые выходы красных форм ФТ находятся в пределах 0,05-0,09. Флуоресцентные свойства исследованных вариантов ФТ позволяют изучать процессы с существенно отличающимися временными характеристиками. Исследованные ФТ можно также использовать при создании пар с зелёными флуоресцентными белками для флуоресцентного индуктивного переноса энергии от голубой формы на зелёную, или от зелёной на красную, что расширяет возможности многоцветной флуоресцентной внутриклеточной детекции.
Опис
Ключові слова
флуоресцентный белок, микроскопия, хромофор, флуоресценция
Бібліографічний опис
Журнал